技术前沿

牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量测定步骤
中国标准物质网 2021-09-18

12.2.5.6测定

(1)液相色谱测定条件

色谱柱: Kromasil 100-5C18,5 μm,150 mm×4.6 mm(内径)或相当者;流动相: 0.01 mol/L草酸溶液-乙腈甲醇(77+18+5,v/v/v); 流速: 1.0 mL/min;柱温: 40℃; 检测波长: 350 nm;进样量:60 μL。

(2)液相色谱测定

将混合标准工作溶液分别进样,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中土霉素四环素金霉素强力霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下,土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的参考保留时间分别为3.09 min、3.73 min、8.27 min和12.53 min。土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图见图12-11。

图12-11 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图

12.2.5.7 分析条件的选择

(1)提取条件的选择

四环素类抗生素分子含有若干亲水的羟基,易溶于水和较低级的伯醇类,在中性和酸性溶液中较稳定。在pH 3~8的范围内离子化,在pH3左右以阳离子形式存在,在pH 7.5以上时以阴离子形式存在。可与二价、三价金属离子阳离子螯合。

牛奶中含有丰富的蛋白质和钙,影响四环素抗生素的提取。采用了20%三氯乙酸硫酸锌-亚铁氢化钾体系、乙腈等作为蛋白沉淀剂,虽然蛋白沉淀效果较好,但回收率均较低。用pH 4.0的Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液提取,并在较低温度下离心,可以起到沉淀蛋白的作用,并掩蔽二价阳离子Ca2+和Mg2+的干扰,可以获得较为满意的回收率,因此选用pH 4.0的Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液为提取液。

(2)净化条件的优化

在实验中,对比了WCX、Oasis HLB单-固相萃取柱和Oasis HLB固相萃取柱加羧酸型阳离子交换柱双柱合用的效果。实验发现,WCX柱净化效果不好且回收率低。单用Oasis HLB固相萃取柱净化,也有较大的干扰峰存在,如图12-12所示;而采用Oasis HLB和羧酸型阳离子交换柱双柱净化,净化效果好,在待测物出峰处无干扰峰,见图12-13。 在对HLB柱的洗脱条件上对比了乙酸乙酯、甲醇以及二者一定比例的溶液,见表12-28。 发现随着甲醇比例的提高,回收率会增加,说明甲醇的洗脱效果较好,当甲醇比例达到50%时和纯甲醇的洗脱效果相差不大,但是考虑到HLB的上样液及淋洗液为水溶液,洗脱溶液有乙酸乙酯存在时,需要对柱体抽干很长时间,洗脱液才能顺利的滴下,所以本方法选择甲醇为HLB洗脱剂。通过试验,用5 mL即可达到完全洗脱的目的。

图12-12 牛奶空白样 品经HLB固相萃取柱净化后色谱图

图 12-13 牛奶空白样品经HLB和Carboxylic Acid双固相萃取柱净化后色谱图

表12-28 不同溶剂对HLB柱的洗脱效果

(3)色谱条件的优化

使用Kromasil 100-5 C18 (150 mm×4.6 mm)液相色谱柱对土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的进行分析,采用0.01 mol/L草酸溶液+乙腈+甲醇溶液(v/v/v)作为流动相,用70+20+10,75+20+5,80+15+5,77+18+5 等不同比例的溶液进行分离,发现以77+18+5比例的流动相可以使4种四环素族抗生素达到很好的分离,并且可以在较短时间内出峰。因此选用此比例的溶液作为流动相。

 

 

文章来源:《兽药多组分残留分析技术》

版权与免责声明:转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的"稿件来源",并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。

0

中国标准物质网  |  北京普天同创生物科技有限公司  |  gbw114.com